質譜分析儀在微生物檢驗領域中的分析優(yōu)勢
質譜分析儀是一種測量離子質荷比(質量-電荷比)的分析方法,其基本原理是使試樣中各組分在離子源中發(fā)生電離,生成不同荷質比的帶電荷的離子,經加速電場的作用,形成離子束,進入質量分析器。
傳統(tǒng)的致病微生物檢測大多采用微生物培養(yǎng)、生物化學和分子生物學的方法檢測,不僅分析周期長而且沒有明確的種群分型標準,往往造成分析結果的滯后和種類分型的誤判。
據(jù)估計,在臨床實驗室中僅在鏈球菌的分類中,就有高達13%的辨別錯誤。近年來,質譜技術在微生物檢驗方面的應用越來越多,這主要得益于其得天獨厚的優(yōu)勢:
(1)可用于多種微生物樣本,如痰液、血液、尿液、腦脊液和胸腹腔積液以及經過培養(yǎng)的樣本;
(2)可用于幾乎所有類型的病原體鑒定和分類檢測,如細菌、真菌及其孢子、病du、寄生蟲等;
(3)可對病原的多種成分進行分析,包括蛋白質、脂質、脂多糖、脂寡糖、DNA、多肽及其他可被離子化的分子;
(4)檢測速度快,例如一個病原微生物的質譜檢定實驗,包括樣本的采集和制備,整個過程不到10 min;
(5)樣本用量少;
(6)樣本前處理簡單;
(7)特異性和準確性高,例如金黃色葡萄球菌的表型鑒定,Rajakaruna等利用基質輔助激光解吸/電離-飛行時間質譜(SELDI-TOF-MS)技術分析了來自臨床實驗室的95個分離群和39個葡萄球菌群,并利用MicrobeLynx軟件成功的識別了各個種群;
(8)高敏感性,例如液相串聯(lián)質譜可以檢測到10~100個細菌或20~50個孢子的存在。在對生物樣本進行處理后,甚至可以在單個菌水平發(fā)現(xiàn)并確定致病菌,使其在微生物尤其是傳染病病原體鑒定方面具有巨大的優(yōu)勢。近年來已建立了微生物胞膜蛋白質、脂多糖、核酸等的指紋數(shù)據(jù)庫,使其檢測更加準確和快速。
目前在細菌檢測中應用較多是飛行質譜技術。通過檢測細菌胞膜成分或表達的特異蛋白對細菌進行種群的鑒別,不僅可以識別病原菌,而且有助于發(fā)現(xiàn)新的病原菌。此外還有用于病原體的藥物敏感性實驗檢測和真菌檢測研究等。